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      PAP(KlenTaq-S 測序酶)說明書

      更新時間:2023-10-24      點擊次數(shù):382

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      產(chǎn)品詳情

      KlenTaq-S 測序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版,為 Taq DNA 聚合酶的大片段,并做了基因突變。本酶具有 5’→3’聚合酶活性,無5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA 聚合酶,KlenTaq-S 測序酶具有很強的 ddNTP 的滲入能力,因此其適用于終止法 DNA 測序或焦磷酸解反應 SNP 分析。

      本公司 KlenTaq-S 測序酶是重組表達,并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

      活性定義活性單位指在 72℃下, 1×AM PCR Buffer 1,30 min 內將 10 nmole dNTP 摻入酸不溶性物質所需的酶量。

      特點

      1.尤其適合 ddNTP 等修飾核苷酸的摻入反應

      2.相比全長 Taq DNA 聚合酶,本酶比活性有所降低

      適用范圍

      ddNTP 終止法DNA 測序(一代測序

      焦磷酸解反應延伸法 SNP 分析

      質量控制

      經(jīng)過嚴格的質控檢測,確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

      酶貯存緩沖液

      20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.

      應用舉例

      以下反應舉例為 50 μl 標準 PCR 體系,僅供參考。實際 PCR 條件應根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化,確定最佳反應條件。

      1) 按下表配制反應體系

      組份

      體積/μl

      終濃度

      10×AM PCR Buffer 1

      5

      dNTPs2.0 mM

      5

      0.2 mM

      引物 F10 μM

      1.5

      0.3 μM

      引物R10 μM

      1.5

      0.3 μM

      Template

      Varable*

      /

      KlenTaq-S測序酶(5U/μl

      0.5

      2.5U

      ddH2O

      Varable

      /

      總體積

      50

      /














      *模板DNA用量參數(shù)(50 μl反應體系):

      人基因組DNA100-1000 ng ; 微生物基因組DNA 10-100ng;PCR產(chǎn)物 1 ng-10 ng; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。

      2) 按如下條件進行反應,

      95

      2-5 min


      95

      15 sec

      25-35 Cycles

      55~72

      20 sec

      72

      1kb/min

      72

      5 min









      3) 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR 產(chǎn)物,或按實驗目的進行后續(xù)操作。


      運輸與保存

      -20℃可保存 2 年,避免反復凍融

      注意事項

      1.PCR 條件和野生型 Taq DNA 聚合酶類似,對特定 DNA 的測序反應可能需要優(yōu)化。2.本酶擴增能力較野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低,PCR 產(chǎn)量有所降低,不建議用于常規(guī) PCR。3.不可用于 Taqman 探針法 q-PCR 濃度5U/uL


      貨號品名規(guī)格品牌
      78BEA10012-250UPAP(KlenTaq-S 測序酶)250UBIOHUB
      78BEA10012-1250UPAP(KlenTaq-S 測序酶)1250UBIOHUB
      78BEA10012-5000UPAP(KlenTaq-S 測序酶)5000UBIOHUB
      78BEA10012-12500UPAP(KlenTaq-S 測序酶)12500UBIOHUB







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